湖 南 中 医 学 院 实 验 报 告

实验名称：建春抗癌合剂对宫颈癌细胞裸鼠移植瘤的抑制实验

　　1.目的

　　观察建春抗癌合剂对宫颈癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用。

　　2. 实验材料

　　2.1 细胞株：人宫颈癌HeLa细胞购自湖南医科大学肿瘤所。

　　2.2 BALB/c裸鼠：购自中南大学动物中心。

　　2.3 药物：实验药物为建春抗癌合剂，对照药物为环磷酰胺。

　　2.4 试剂：1640培养基，小牛血清，胰蛋白酶，苔盼蓝，抗生素等。

　　2.5 器材：超净工作台，倒置显微镜，CO2培养箱，层流柜，移液器，细胞培养板，培养瓶，游标卡尺等。

　　3. 实验方法

　　3.1 细胞培养：1640培养基加小牛血清和双抗，培养HeLa细胞，制备指数生长期细胞悬液(1.0×107/ml)。

　　3.2 裸鼠喂养：按裸鼠饲养要求，水、垫草和饲料均经高温或紫外线灭菌。在相对无菌条件下饲养一周，无异常者才进行接种实验。

　　3.3 接种：在无明显异常裸鼠的右腋处皮下注射HeLa细胞悬液(1.0×107/ml)0.5ml。每天观察裸鼠活动情况，并作记录，隔天精确测量肿瘤大小，每周照相2次。

　　3.4 分组和治疗：待肿瘤生长达到一定体积后，将其随机分为四组，三组分别局部注射建春抗癌合剂、环磷酰胺、生理盐水，剩余一组不予任何处理作为空白对照。使用剂量均参照人体常用剂量按通用公式折算，隔日用药一次。继续每日观察裸鼠活力。治疗两周后，处死动物，解剖肿瘤，称量瘤重，计算抑瘤率。

　　3.5 瘤体病理组织学观察：处死动物后，解剖肿瘤，取部分瘤体于10%福尔马林中固定，石蜡切片，常规光镜观察。

　　4. 结果

　　4.1 治疗前后各组移植瘤体积的比较：见表1。

表1 治疗前后各组移植瘤体积的比较(cm3)

　　4.2 治疗前后各组移植瘤折算重量的比较：见表2

表2 治疗前后各组瘤体重量的比较(g)

　　4.3 用药各组抑瘤率的比较：见表3

表3 用药组与空白对照组抑瘤率的比较(%)

　　4.4 治疗前后各组裸鼠照片：见图1。图Ia、IIa、IIIa、IVa分别示治疗前各组(依次为建春抗癌合剂治疗组、环磷酰胺组、生理盐水组、空白组)裸鼠的移植瘤;图Ib、IIb、IIIb、IVb分别示治疗两周各组裸鼠的移植瘤;图Ic、IIc、IIIc、IVc分别示治疗两周各组解剖之瘤体。

　　用解剖刀从正中剖开瘤体，观察切面，见建春抗癌合剂组瘤体颜色暗黑，瘤体内部液化，表面干枯，结成硬壳，切面细胞大片状坏死;环磷酰胺组与阴性对照组无明显差异;阴性对照组瘤体较硬，切面较完整;空白对照组瘤体颜色鲜艳，瘤体硬，切面完整。各组瘤体包膜完整，均无脏器转移。

　　4.5 病理组织学观察：各组石膜切片显微照相(见图2)，治疗组与对照组存在明显差异。建春抗癌合剂治疗组显示癌细胞坏死明显，可见大片均质性无细胞区域，癌巢结构消失。生理盐水对照组和空白对照组显示癌巢结构典型，癌细胞结构清晰，增生活跃，坏死不明显。

　　4.6 药物毒性：环磷酰胺组治疗两周后，所有裸鼠均死亡，全身青紫;而建春抗癌合剂组、生理盐水组和空白对照组无明显异常表现。

　　5. 结论：

　　5.1 治疗各组瘤体体积比较：由表1数据绘制成瘤体体积增长曲线(见图3)，用药各组治疗前后体积差值均低于阴性对照组和空白对照组，但只有建春抗癌合剂组差值有显著性意义，瘤体增长缓慢，且有下降趋势。环磷酰胺组治疗前后瘤体体积差值与对照组相差不大，疗效较差。

　　5.2 治疗各组瘤体重量比较：由表2数据绘制成瘤体重量增长曲线(见图4)，用药各组治疗前后瘤重差值均低于阴性对照组和空白对照组，但只有建春抗癌合剂治疗组差值有显著性意义。环磷酰胺组治疗前后瘤体重量差值与对照组相差不大，疗效较差。

　　5.3 用药组抑瘤率比较：由表3可知，建春抗癌合剂组抑瘤率明显大于环磷酰胺组，存在显著性差异。

　　5.4 治疗各组瘤体病理组织学比较：建春抗癌合剂组瘤细胞大片状坏死，呈均质性无细胞结构区;生理盐水对照组病理组织学图像与空白对照组相似，瘤细胞坏死现象不明显，癌巢结构典型。

　　5.5 药物毒性：环磷酰胺组治疗两周后，受试裸鼠全部死亡，系该药物的毒副作用所致;建春抗癌合剂组的受试裸鼠不仅无明显异常反应，而且裸鼠活力强，表明该药无明显毒副作用。

建春抗癌口服液急性毒性试验资料

　　一、实验材料

　　1.1 药物：建春抗癌口服液(现名：建春抗癌合剂，下同)，由湖南省湘潭市雨湖区中医肿瘤研究所(现名：湘潭建春医院)提供，批号981110，含鲜药材量0.55g/ml，临用时浓缩至9.17g/ml(此为最大浓度)。

　　1.2 动物：清洁级昆明种小鼠，20~22g，70只，雌雄各半，湖南医科大学实验动物学部提供。动物均自由饮食，实验温度20~25℃。

　　二、方法与结果

　　经10只小鼠预试，1g测不出LD50，故进行最大耐受量测定。

　　取小鼠60只，20~22g，雌雄各半，随机分三组，每组20只，隔食12小时后，灌胃建春抗癌口服液浓缩液0.8ml/20g，第一组给物1次，第二组给药2次，第三组给药3次，每次给药间隔6小时，给药后连续观察7天动物的毒性反应，包括行为、活动、精神状态、食欲、大小便以及毛发、呼吸、鼻、眼、口腔有无异常分泌物。体重变化及死亡情况。结果第一组无一只动物死亡，第二组死亡4只，第三组死亡6只。未死动物体重平均增加25%。第八天处死动物，解剖，肉眼观察心、肝、脾、肾、肺、胃、肠等主要脏器，未见异常，结果小鼠ig建春抗癌口服液每日最大耐受量为367g/kg(鲜药量)，相当于临床50公斤人一日用量(100ml/次，三次/日，共165g/50kg=3.3g/kg 鲜药量)的111倍。

　　三、结论

　　建春抗癌口服液口服367g鲜药/kg，相当于临床50kg成人一日用量的111倍，未见毒性反应，提示本品毒性小，在临床推荐的用药量下使用是安全，但若超过此量，则显示一定的毒性。